犀角地黄汤通过线粒体途径抑制血小板凋亡的研究

Research on Xijiao Dihuang Decoction Suppressing Platelet Apoptosis in Immune-Mediated Aplastic Anemia Based on Mitochondrial mediated Pathway

Le-Min Xia , Le-Le Cui , Yi-Ling Jiang , Qin Zheng, Ai-Ping Zhang, Mei-Hong Luo

再生障碍性贫血导致血小板减少所引起的出血表现，可归属于中医“血证”范畴，急性出血如衄血、咯血、呕血等，常突然发生，血色鲜红，伴有舌红，脉数等症状，与中医血热妄行证不谋而合。正如《济生方·吐衄》所云：“夫血之妄行也，未有不因热之所发，盖血得热则淖溢。”根据中医病机结合临床实践，凉血止血法是急性出血主要治法。数据统计亦显示，临床上凉血止血法在“血证”治疗运用最多，占一半以上。

犀角地黄汤出自《备急千金要方》，为凉血止血法代表方之一，用于急性出血血热妄行证疗效良好。由牛角30g，生地黄24g，赤芍12g，牡丹9g组成，方用苦咸寒之犀角（临床上多用水牛角代替）为君，凉血清心而解热毒，使火平热降，毒解血宁。臣以甘苦寒之生地，凉血滋阴生津，一以助犀角清热凉血，又能止血；一以复已失之阴血。用苦微寒之赤芍与辛苦微寒之丹皮共为佐药，清热凉血，活血散瘀，可收化斑之功。四药相配，共成凉血止血法之剂。犀角地黄汤最早即用于治疗血证，《千金方》用其治鼻衄、吐血，宋金元时代有以此方治呕血、血淋之记载，清代以后广泛应用犀角地黄汤治疗吐血、衄血、嗽血、下血等多种血证。该方所治疗的血证多表现为发生突然，血色鲜红，亦符合再生障碍性贫血急性出血的临床表现。著名血液学家黄振翘认为，急性再生障碍性贫血早期以邪盛标实为突出,外感温热邪毒,实火充斥,症见鼻衄、齿衄等出血表现,治用解毒散邪、凉血止血以尽早、尽快控制症状，选方多用犀角地黄汤加减。临床上犀角地黄汤常用于血小板减少急性出血的治疗，能升高血小板，改善出血症状，总有效率约98%左右。

本研究建立了免疫介导再生障碍性贫血模型小鼠：近交系 C57BL/6 小鼠，经 60Co-γ射线全身照射（5.5Gy）（1.1Gy/min×5 min）后，4 h 内经尾静脉输入 DBA/2 小鼠的淋巴细胞悬液 1×10⁶cells /只。实验分组：正常组（健康小鼠，生理盐水灌胃），AA组（再生障碍性贫血小鼠模型，生理盐水胃），XDD组（再生障碍性贫血小鼠模型，19.5g/kg 犀角地黄汤灌胃），CSA组（再生障碍性贫血小鼠模型，0.027g/kg环孢霉素灌胃）。连续给药3天后测量小鼠血小板数量，ΔΨm,  Cyt C,  PS, Ca²⁺的变化，并用western 检测Bak, Bax, caspase-3, caspase-8, and caspase-9 酶原的表达。

结果发现与AA组相比较，犀角地黄汤能明显恢复血小板计数，调控线粒体跨膜电位和相关凋亡蛋白Bak, Bax，caspase-8，caspase-3,  caspase-9的表达。我们推测犀角地黄汤可能是通过线粒体途径来抑制血小板凋亡，从而改善小鼠的再生障碍性贫血出血症状。这一发现为再生障碍性贫血中出现的血小板减少的治疗提供了一个新思路。  

通讯作者：罗梅宏

主任医师，硕士研究生导师，医学博士，有博士后流动站工作经历，首届宝山区名中医。中华中医药学会血液病分会委员、中国中西医结合学会血液病专业委员会青年委员、中国中西医结合学会诊断专业委员会青年委员、第五届上海市中西医结合学会血液病专业委员会常务委员、第三届上海市中医药学会血液病分会委员等学术职务。从事中医药治疗血液病的临床和实验研究20余年。主持、参与国家级及省部级课题多项，获得科技成果3项，发表文章30余篇。

第一作者：夏乐敏

上海中医药大学，中西医结合临床专业博士研究生，主要从事中西医结合血液学研究，参加国家级及省部级课题多项，以第一作者发表论文30余篇，曾获得“岐黄奖第六届全国中医药博士生优秀论文评选活动”优秀论文二等奖。

共同第一作者：崔乐乐

上海中医药大学，中医内科临床专业硕士研究生，主要从事中医血液学研究，参加国家级及省部级课题多项，发表论文2篇，曾多次获得校内奖学金。

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